Что такое рнк препарат

Что необходимо знать о мРНК-вакцинах: 5 позиций

В результате беспрецедентной скорости в разработке новых вакцин, миру были представлены первые клинически одобренные мРНК-вакцины

В результате беспрецедентной скорости в разработке новых вакцин, миру были представлены первые клинически одобренные мРНК-вакцины для борьбы с пандемией Covid-19 – одна из них произведена Pfizer и BioNTech, другая – компанией Moderna. Испытания показали эффективность этих вакцин на уровне не менее чем 94%.

1. Технология мРНК вакцин не так молода, как кажется

Классический механизм работы вакцин (например, против полиомиелита и гриппа) заключается в презентации иммунной системе инактивированных частиц вируса. Другие вакцины (например, против гепатита B) используют отдельно взятый белок, являющийся частью инфекционного агента, чтобы вызвать схожий иммунный ответ.

мРНК-вакцины работают по другому принципу, «обманывая» иммунную систему таким образом, что РНК (в основном матричная мРНК) кодирует белок, который продуцируется в клетке путем трансляции и представляется иммунной системе; он действует как антиген. Иммунная система учится избирательно бороться с клетками, экспрессирующими такие антигены, такими как клетки-хозяева, инфицированные вирусами, или опухолевые клетки.

Хотя вакцины от Pfizer/BioNTech и Moderna – первые препараты, одобренные в клинической практике, сама технология мРНК-вакцин существует относительно давно. Первые испытания в онкологии с использованием схожих технологий берут свое начало еще в 2011 году.

2. мРНК-вакцины не изменяют ДНК

Существуют абсолютно необоснованные опасения, что мРНК-вакцины способны изменять ДНК. На самом же деле мРНК не входит в ядро клетки, а после своего введения биодеградирует в течение нескольких дней. Именно поэтому для формирования полноценного иммунного ответа необходимо 2 инъекции препарата.

3. мРНК-вакцины имеют высокую специфичность

Вирус SARS-CoV-2 имеет достаточно сложную структуру и его различные части стимулируют иммунную систему на образование нейтрализующих антител, которые не всегда способны эффективно элиминировать инфекцию. мРНК-вакцины стимулируют иммунный ответ к спайк-белку вируса, являющегося только частью вирусной мембраны.

4. Разработчики и эксперты не «срезали углы» во время клинических испытаний

Испытания вакцин начались с доклинической фазы, проводимой на животных, а затем постепенно переходили на 1-ую, 2-ую и 3-ю фазы. Например, 3-я фаза вакцины от Pfizer/BioNTech включает более 40 000 человек, исследования эффективности и безопасности будут продлжаться следующие 2 года.

Основные проблемы, связанные с использованием вакцины, обычно возникают в первые 2 месяца. Тем не менее, не исключены редкие побочные эффекты на больших выборках в миллионы людей, поэтому за вакцинированными необходимо пристальное наблюдение, особенно с учетом инновационной природы технологии.

5. Вакцина запускает воспалительные реакции

Частично вакцина работает путем индуцирования локальных иммунных реакций, поэтому воспалительные признаки в месте инъекции и небольшой дискомфорт в первые дни – вполне нормальное явление.

Источник

Вакцины против COVID-19 на основе информационной РНК (иРНК): как они работают?

Специалист по инфекционным заболеваниям Тобиас Холь объясняет, что вакцина на основе информационной РНК побуждает собственные клетки организма вырабатывать фрагмент белка, обнаруженный в возбудителе COVID-19, и это вызывает защитную иммунную реакцию.

В вакцинах Pfizer-BioNTech (Comirnaty®) и Moderna против COVID-19 использована информационная рибонуклеиновая кислота (иРНК), вызывающая иммунную реакцию, которая может защитить от заражения в будущем. Специалист центра Memorial Sloan Kettering по инфекционным заболеваниям Тобиас Холь (Tobias Hohl) рассказывает о технологии изготовления вакцин на основе иРНК.

Каков механизм действия вакцин против COVID-19 на основе информационной РНК (иРНК)?

Традиционные вакцины предполагают введение в организм ослабленного или инактивированного возбудителя инфекции. Вакцины на основе информационной РНК (иРНК), например вакцины против COVID-19 Pfizer и Moderna, учат клетки вырабатывать белок, который запускает иммунную реакцию в случае заражения. После введения вакцины в плечо иРНК попадает в клетки вблизи места инъекции и побуждает их начать выработку того же белка, который обнаружен в возбудителе COVID-19. Иммунная система распознает этот белок и начинает вырабатывать антитела, которые могут бороться с вирусом в случае последующего заражения вакцинированного человека.

Правда: ни одна из вакцин никоим образом не взаимодействует с ДНК и не изменяет ее и, следовательно, не может вызывать рак. Информационная РНК — это не то же самое, что ДНК, поэтому она не может объединяться с ДНК и изменять генетический код. Информационная РНК хрупкая — передав инструкции вашим клеткам, она разрушается и выводится из организма (примерно через 72 часа). Информационная РНК даже не попадает в ядро клетки — ту часть, где содержится ДНК. Следовательно, миф о том, что вакцина на основе иРНК может каким-то образом блокировать активность генов, подавляющих раковые опухоли, не соответствует действительности.

Вакцина против COVID-19 не подвергает вас воздействию вируса, вызывающего COVID-19.

Есть ли другие вакцины на основе иРНК?

Это первые вакцины на основе иРНК, которые будут изготовлены и испытаны в ходе крупномасштабных клинических исследований 3 фазы с участием человека. Преимущество технологии использования иРНК в сравнении с традиционными подходами состоит в том, что она обеспечивает более быструю разработку и расширение производства. Разработка вакцин традиционно длилась десятилетиями. То, что мы имеем на сегодняшний день, — невероятное научное достижение.

Почему вакцины на основе иРНК необходимо хранить при такой низкой температуре?

Если иРНК не хранится при низкой температуре, она легко и быстро распадается. После введения в организм это не представляет проблемы, так как иРНК не нужно много времени, чтобы выполнить свою функцию. Однако может возникнуть необходимость сохранять вакцины в стабильном состоянии в течение нескольких дней или даже недель, прежде чем они будут введены. С традиционными вакцинами это практически не имело значения. Ослабленные или инактивированные версии вируса могут оставаться стабильными в течение более длительного времени без низких температур.

В ходе клинических исследований вакцина Pfizer хранилась при –70 градусах Цельсия (–94 градуса по Фаренгейту), что предполагает использование сухого льда. Вакцина Moderna хранилась при –20 градусах Цельсия (–4 градуса по Фаренгейту), что ближе к температуре в обычном холодильнике. Обе вакцины по-прежнему следует хранить замороженными — одобрение вакцины происходит на основании данных, полученных в ходе клинических исследований, поэтому необходимо, чтобы условия оставались такими же.

Идея в том, что первая прививка подготавливает иммунную систему, помогая ей распознать вирус, а вторая усиливает иммунную реакцию. Вторая прививка вакциной Pfizer проводится через три недели после первой; для вакцины Moderna этот интервал составляет четыре недели. Важно, чтобы обе прививки были сделаны одной и той же вакциной, и чтобы были соблюдены те же процедуры, которые обеспечили такие успешные результаты в ходе клинических исследований.

Как люди могут быть уверены в том, что эти вакцины на основе иРНК эффективны и безопасны?

Мы располагаем данными в отношении миллионов людей и знаем, что эти вакцины очень эффективны в предотвращении тяжелой формы COVID-19.

У некоторых людей возникают легкие или умеренные побочные эффекты, но длятся они недолго — около одного–трех дней. Наиболее распространенные побочные эффекты включают боль в месте инъекции, слабость (чувство усталости), головную боль, ломоту и повышенную температуру. Чаще они возникают после второй прививки, и вам, возможно, придется больше отдыхать. Серьезные побочные эффекты возникают редко и поддаются лечению.

Людям важно понимать, что эти данные проверяются независимыми группами специалистов, не связанными с фармацевтическими компаниями, производящими препараты. Это специалисты, которые не имеют никакой заинтересованности в разработке или коммерческой реализации вакцин. Лично я бы не раздумывая вакцинировался любой из этих вакцин и посоветовал бы своим родственникам и коллегам сделать то же самое.

Вакцины являются важным элементом решения проблемы пандемии. Но мы знаем, что ношение масок и мытье рук могут дать нам дополнительную защиту, особенно с учетом появления новых штаммов.

Источник

Чем лечат коронавирус: 8 перспективных препаратов

Как сообщил РБК Виктор Малеев, советник НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, пока в мире не созданы эффективные средства и для лечения коронавируса врачи применяют комбинации существующих. Каких именно, Минздрав уточнил в списке рекомендованных препаратов. В их число вошли гидроксихлорохин, интерферон, лопинавир и ритонавир.

В начале сентября Минздрав выпустил обновленную, восьмую версию рекомендаций по профилактике, диагностике и лечению новой коронавирусной инфекции COVID-19. Доступная инфографика опубликована на сайте министерства.

Как отмечают эксперты, для профилактики коронавируса можно использовать препараты умифеновир, рекомбинантный интерферон альфа (ИФН-α). После контакта с зараженным SARS-CoV-2 нужно принимать гидроксихлорохин.

Материал прокомментировала и проверила Поленова Наталья Валерьевна, кандидат медицинских наук, семейный врач, кардиолог, детский кардиолог, диетолог GMS Clinic.

Что известно о COVID-19

COVID-19 — инфекционное заболевание, которое вызывает коронавирус SARS-CoV-2. Обнаруженный в Китае в конце 2019 года, к 15 мая он поразил 4,4 млн человек во всем мире. Большинство тех, у кого выявлены симптомы, жалуются на высокую температуру, кашель и затрудненное дыхание. Специальные лекарства и вакцины против COVID-19 пока не разработаны. Однако вирусолог, руководитель лаборатории геномной инженерии МФТИ Павел Волчков сообщил, что первое эффективное средство от коронавирусной инфекции может появиться осенью.

В целом для лечения коронавируса Минздрав рекомендует использовать шесть лекарств. это фавипиравир, ремдесивир, умифеновир, гидроксихлорохин, азитромицин и интерферон альфа.

Гидроксихлорохин и мефлохин

Препаратами на основе хлорохина врачи уже больше 70 лет лечат малярию и аутоиммунные заболевания (например системную красную волчанку). Ученые обнаружили, что активное вещество эффективно и против вируса SARS-CoV-2. В марте китайский холдинг Shanghai Pharmaceuticals предоставил России для лечения COVID-19 препарат гидроксихлорохин (производное хлорохина). Минздрав не выявил противопоказаний и разрешил применение, передав в больницы более 68 тыс. упаковок, несмотря на то что в России гидроксихлорохин не зарегистрирован.

Ученые до сих пор спорят, насколько обосновано применение гидроксихлорохина. Исследования французского инфекциониста Дидье Рауля показали положительные результаты. Но Associated Press опубликовало данные американских исследований. Анализ историй болезни пациентов, которых лечили при помощи препарата, показал, что гидроксихлорохин помогает хуже, чем стандартные средства.

Федеральное медико-биологическое агентство РФ в апреле провело клинические испытания мефлохина (утвержденный в России аналог гидроксихлорохина). Ученые выясняли, насколько этот противомалярийный препарат эффективнее и безопаснее. По предварительным данным исследования с участием 347 пациентов, после применения мефлохина в 78% случаев отмечена положительная динамика. Окончательные выводы ФМБА предоставит в конце мая.

Лопинавир и ритонавир

Комбинация противовирусных средств под названием калетра используется для лечения ВИЧ. По данным ВОЗ, применение средства в сочетании с другими лекарствами эффективно при борьбе с коронавирусом. В конце января Минздрав включил лопинавир с ритовинаром в список препаратов, рекомендуемых при COVID-19 в качестве противовирусной терапии. В результате спрос и продажа калетры выросли в десятки раз. Эксперты предупреждают, что бесконтрольный прием средства без назначения врача может причинить вред здоровью, в том числе вызвать диарею и поражения печени.

Китайские ученые обнаружили, что лопинавир и ритонавир не эффективны при лечении легкой или средней стадии COVID-19. Прием препаратов не улучшает клиническую картину, более того, может вызывать побочные эффекты. В эксперименте участвовали 86 пациентов, из них 34 человека принимали комбинацию лопинавира и ритонавира, а 17 больных не получали никаких препаратов. Спустя две недели обе группы показали аналогичные результаты, но те, кто принимал лекарства, испытывали побочные эффекты.

Ремдесивир

Ремдесивир применяют для лечения лихорадки Эбола. Канадские ученые из Университета Альберты выяснили, что препарат блокирует размножение коронавируса. Исследования доказали эффективность противовирусного средства при лечении респираторного синдрома MERS и атипичной пневмонии SARS-CoV, структура РНК которых аналогична коронавирусу. Вирусологи получили идентичные результаты в случае с SARS-CoV-2, вызывающим COVID-19, и пришли к выводу, что ремдесивир можно использовать для лечения. New England Journal of Medicine также опубликовал результаты исследования, в ходе которого применение препарата улучшило состояние 68% пациентов. Премьер-министр Японии Синдзо Абэ 28 апреля заявил в парламенте, что планирует разрешить использование ремдесевира для лечения COVID-19. В США препарат прошел успешные испытания, и 2 мая Управление по санитарному надзору экстренно выдало разрешение на его применение.

APN01

Австрийская биотехнологическая компания APEIRON Biologics AGН начала клинические испытания препарата APN01, который был разработан в начале 2000-х годов. Ученые обнаружили, что белок ACE2, входящий в его состав, подавляет инфекции, вызванные вирусами группы SARS. А также помогает защитить легкие при дыхательной недостаточности.

Власти Австрии, Германии и Дании согласились провести клинические испытания препарата. В ходе исследований 200 пациентов с COVID-19 получат APN01. Затем вирусологи оценят действие средства, а также проанализируют его эффективность и безопасность для больных, которым необходима искусственная вентиляция легких.

Фавилавир (фавипиравир)

Китайские врачи одобрили для лечения COVID-19 противовирусный препарат фавилавир (фавипиравир). Это средство применяют при воспалениях органов дыхательной системы. Результаты исследований, проведенных среди 70 человек, пока не опубликованы, но препарат, как утверждают вирусологи, доказал эффективность.

В феврале фармацевтическая компания Zhejiang Hisun Pharmaceutical получила разрешение на продажу фавипиравира как потенциального лекарства от коронавируса.

Рибавирин

Оценить эффективность и безопасность рибавирина достаточно сложно. С одной стороны, это средство угнетает размножение подавляющего большинства вирусов, с другой — механизм действия рибавирина до конца не изучен. В конце января Минздрав рекомендовал использовать это противовирусное средство для лечения коронавируса. Детям его назначают при респираторно-синцитиальной инфекции (редкая разновидность ОРВИ), которая вызывает тяжелое поражение легких. Препарат применяют при тяжелом гриппе, у детей с иммунодефицитом — при кори, а в сочетании с интерфероном рибавирином лечат вирусный гепатит С.

Однако академик РАН Александр Чучалин раскритиковал рекомендации Минздрава. При назначении препарата взрослым необходимо учитывать его тератогенность (угрозу нарушения эмбрионального развития), поэтому рибавирин категорически противопоказан при беременности. Несмотря на то что средство угнетает размножение многих вирусов, оно очень токсично и вызывает множество побочных эффектов.

В конце марта Минздрав исключил рибавирин из списка рекомендованных лекарств для лечения COVID-19.

Ивермектин

Австралийские ученые из университета Монаша и Королевского госпиталя в Мельбурне обнаружили антипаразитарное средство, которое в течение 48 часов практически уничтожает вирус SARS-CoV-2, уменьшая его присутствие на 99%. По мнению исследователей, применение ивермектина поможет избежать тяжелых осложнений COVID-19, а также предотвратить распространение вируса. В ходе опытов в зараженные SARS-CoV-2 клетки добавляли ивермектин. Через 24 часа доля вирусных РНК снижалась на 93%, а спустя 48 часов присутствие вируса уменьшалось на 99%.

Однократная обработка ивермектином способна за 48 часов вызывать уменьшение вируса в 5 тыс. раз, утверждают ученые. Препарат одобрен ВОЗ.

Нелфинавир

В комбинации с другими противовирусными препаратами нелфинавир используют для лечения ВИЧ. Исследование проводили японские ученые. Согласно полученным данным, препарат способен блокировать размножение SARS-CoV-2. Вирусологи исследовали девять аналогичных средств и обнаружили, что нелфинавир эффективен даже в небольших дозах. Поэтому его рекомендуют включить в перечень потенциально эффективных препаратов для лечения COVID-19.

Что делать, пока нет вакцины

Комментарий эксперта

Какие лекарства, кроме противовирусных препаратов и антибиотиков, рекомендованы для лечения COVID-19 Минздравом РФ?

Согласно восьмой версии постановления «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19) Минздрава РФ, пациенты, инфицированные вирусом SARS-CoV-2, должны получать при необходимости патогенетическую и поддерживающую симптоматическую терапию. К первой группе препаратов относятся, в первую очередь: глюкокортикостероиды (ГКС), ингибиторы интерлейкинов (тоцилизумаб, канакинумаб), антикоагулянты (эноксапарин, фраксипарин).

Глюкокортикостероиды способны предупреждать высвобождения цитокинов, веществ, отвечающих за развитие бурной воспалительной реакции, которая может привести очень опасному осложнению «цитокиновому шторму». ГКС могут быть полезны в лечении тяжелых форм COVID-19 для предотвращения необратимого повреждения тканей и неконтролируемой полиорганной недостаточности.

Следует отметить, что при легкой и средней степени тяжести течения заболевания, то есть пациентам, не получающих кислород, ГКс не показаны. Так что скупать гормоны из аптек для применения дома нет ни малейшей необходимости.

Препараты из группы ингибиторов цитокинов применяются при поражении паренхимы легких более чем на 50%, то есть стадия КТ-3, КТ-4 в сочетании с признаками нарастания интоксикации: длительно существующая лихорадка, очень высокие уровни воспалительных маркеров в крови.

В группах пациентов высокого риска тромбообразования для профилактики, так называемых, коагулопатий, целесообразно назначение антикоагулянтов, применяемых подкожно. Доказательств эффективности пероральных антикоагулянтов при COVID-19 пока недостаточно, однако, если пациент принимал их до заболевания, до прием препарата необходимо продолжить. К группам высокого риска относятся пациенты с сердечно-сосудистой патологией, сахарным диабетом, ожирением.

Как проводится симптоматическая терапия коронавируса?

К препаратам симптоматической терапии COVID-19 относят жаропонижающие лекарства, противокашлевые препараты, улучшающие отхождение мокроты. Наиболее безопасным жаропонижающим препаратом признан парацетамол.

Нет необходимости дожидаться определенного уровня лихорадки для применения жаропонижающего средства. При наличии головной и мышечной боли, плохой переносимости симптомов интоксикации и лихорадки, возможно применение препаратов и при относительно невысокой температуре тела.

Что можно принимать для профилактики коронавируса?

Важнейшими характеристиками рациона, способствующего укреплению иммунитета являются: адекватная суточная калорийность, достаточное потребление белка и ряда микронутриентов, в особенности, витамина С, Д, А, железа и цинка, повышение потребление пищевых волокон и, при необходимости, пробиотиков, соблюдение водного баланса. Согласно клиническим рекомендациями Российской Ассоциации эндокринологов, для профилектики дефицита витамина D у взрослых в возрасте 18-50 лет рекомендуется получать не менее 600-800 МЕ витамина в сутки. Людям старше 50 лет — не менее 800-1000 МЕ витамина D в сутки.

Существуют некоторые косвенные признаки потенциального противовирусного эффекта цинка против COVID-19, хотя их биомедицинские актуальность еще предстоит изучить. С учетом последних данных о клиническом течение болезни, кажется, что цинк может обладать защитным действием против COVID-19 за счет уменьшения частоты пневмонии, предотвращения повреждения легких, вызванного аппаратами ИВЛ, улучшения антибактериального и противовирусного иммунитета, особенно у пожилых людей.

Аскорбиновая кислота (витамин C, АК) принимает участие в таких жизненно важных физиологических процессах, как продукция гормонов, синтез коллагена, стимуляция иммунной системы и пр. Последний эффект может быть обусловлен как прямым противовирусным действием АК, так и ее противовоспалительными и антиоксидантными свойствами.

Источник

Преимущества мРНК-вакцин против инфекционных заболеваний

Текущая информация о научном прогрессе в области мРНК-вакцин

Преимущества мРНК-вакцин против инфекционных заболеваний

Перевод из журнала Frontiers in Immunology (оригинал).

Опубликовано 27 марта 2019 г.

Аннотация

Введение

Вакцинация представляет собой наиболее успешный медицинский подход к профилактике и контролю заболеваний. Успешная разработка и применение вакцин уже спасли тысячи жизней и огромное количество денежных средств. В будущем вакцины смогут применяться не только против инфекционных заболеваний, но также и против рака в качестве средств профилактики и лечения, а также для элиминации аллергенов 2. До 1980-х гг. вакцины разрабатывались с целью защиты от микроорганизмов. Опытным путем получали инактивированные вакцины либо методом нагревания, либо химической обработкой, а также получали живые аттенуированные вакцины, главным образом с использованием животных, клеточных линий или неблагоприятных для роста условий. В ходе разработки вакцины механизмы, вовлеченные в процесс иммунизации, оставались неизвестными. Тем не менее, использование живых аттенуированных вакцин или убитых цельноклеточных вакцин имело колоссальный успех для контроля и эрадикации ряда тяжелых инфекционных заболеваний человека, включая натуральную оспу, полиомиелит, корь, паротит, краснуху, а также инфекционных заболеваний животных, таких как классическая чума свиней, чума рогатого скота и инфекционная анемия лошадей. В последнее время благодаря успехам в теории и практике молекулярной биологии были разработаны живые аттенуированные (LAV), субъединичные и пептидные вакцины. Результаты, полученные при вакцинации живыми ослабленными вакцинами, очень сильно расширили наши представления о механизмах, связанных с иммунным ответом, вызванным этими вакцинами. В случае инактивированных вакцин главный вклад в профилактику и контроль инфекционных заболевания, вызванных микроорганизмами, вносят антиген-специфичные антитела. LAV вызывают сильный клеточный иммунный ответ, который имеет решающее значение для эрадикации многих внутриклеточных патогенов. Тем не менее, неудачи, которые иногда случаются при использовании инактивированных вакцин, объясняются мутацией поверхностных антигенов патогена. Дополнительные вопросы о применении LAV включают их способность вызывать заболевание у лиц с ослабленным иммунитетом, а также возможность возврата к вирулентной форме из-за обратной мутации, приобретения компенсаторных мутаций или рекомбинации с циркулирующими передаваемыми штаммами дикого типа [4, 5]. Тем не менее, субъединичные и пептидные вакцины менее эффективны для вызывания устойчивого CD8+ иммунного ответа, который важен в случае внутриклеточных патогенов, включая вирусы и некоторые бактерии [6, 7].
Использование вакцин на основе нуклеиновых кислот с невирусной доставкой против имитаторов инфекций или иммунизация живыми микроорганизмами стимулирует возможности фолликулярного Т-хелпера и иммунный ответ зародышевой B-клетки [8, 9]. Более того, производство вакцины на основе нуклеиновых кислот с невирусной доставкой безопасно и экономно с точки зрения времени, не дает роста высокопатогенных организмов в большом масштабе, а также менее рискованно в смысле загрязнения живыми инфекционными агентами и утечки опасных патогенов. Следует заметить, что наибольшую трудность представляет получение нужного запаса за короткое время [10]. Вакцины на основе нуклеиновых кислот с невирусной доставкой могут удовлетворить потребность в вакцинах против эпидемических заболеваний [10]. Нуклеиновые кислоты с невирусной доставкой подразделяются на ДНК- и РНК- в соответствии со своим типом сахарида, содержащего 5 атомов углерода. ДНК-вакцины и РНК-вакцины действуют по-разному. На этапах между иммунизацией при помощи ДНК-матрицы и экспрессией целевого антигена, ДНК должна преодолеть цитоплазматическую мембрану и оболочку ядра клетки, быть транскрибирована в мРНК и переместиться обратно в цитоплазму для инициации трансляции (Рис. 1). Несмотря на то, что ДНК-вакцины имеют многообещающие свойства и характеризуются доказанными безопасностью, переносимостью и иммуногенностью, по данным ранних клинических испытаний, они имеют неоптимальную специфическую активность [11]. Улучшенные технологии доставки, такие как электропорация, повышали эффективность ДНК-вакцин у человека [12], но не уменьшали возможный риск интеграции чужеродной ДНК в геном хозяина, что может вызвать тяжелые мутации и новые заболевания [13, 14]. После того, как было обнаружено, что депротеинизированная ДНК, in vitro транскрибированная в мРНК, может быть экспрессирована in vivo после прямой инъекции в мышцу мыши, мРНК стала широко изучаться в качестве основы для профилактики и терапии 17. Для сравнения, мРНК-вакцины обладают рядом преимуществ относительно вакцин на основе вирусного вектора и ДНК-вакцин (суммировано в Табл. 1). Использование РНК в качестве терапевтического инструмента не находится в фокусе внимания данной работы и широко представлено в других источниках [2, 19, 20]. В данном обзоре мы представляем мРНК-вакцины как многообещающее средство профилактики и контроля инфекционного заболевания.

Таблица 1. Преимущества и недостатки вирусных вакцин, ДНК- и РНК-вакцин

Концепция и виды мРНК-вакцин

Впервые о том, что мРНК-вакцины эффективны для прямого переноса генов, сообщили Woff и соавт. [15]. В настоящее время разработаны два вида мРНК-вакцин: обычные мРНК-вакцины и самоамплифицирующиеся мРНК-вакцины, полученные из положительной цепи РНК вирусов. Хотя мРНК-вакцины впервые испытывались в начале 1990-х гг., сперва они не применялись широко по причине опасений, связанных с их ненадежной стабильностью, обусловленной повсеместным присутствием рибонуклеаз, а также из-за малых масштабов производства. Ross и соавт. в 1995 г. впервые продемонстрировали, что стабильность мРНК может быть повышена путем оптимизации и подбора состава препарата [25]. С этого момента начался быстрый прогресс в исследованиях мРНК-вакцин, в настоящее мРНК можно производить синтетическим путем посредством внеклеточной реакции ферментативной транскрипции. Реакция транскрипции in vitro включает в качестве основных компонентов линеаризованную плазмидную ДНК, кодирующую мРНК-вакцину, в качестве шаблона, рекомбинантную РНК-полимеразу и нуклеозидтрифосфаты. Кэп-структура ферментативно добавляется к продукту транскрипции в конце реакции, или как синтетический аналог кэпа при одноэтапной процедуре. В завершение получают поли(А)-хвост для образования зрелой мРНК-последовательности.
Обычные мРНК-вакцины включают в самом простом своем варианте открытую рамку считывания для целевого антигена, защищенную по краям нетранскрибируемыми участками (UTRs), а также с концевым поли(А)-хвостом. После трансфекции они управляют транзиторной экспрессией антигена. Дополнительно к обычным вакцинам существует другая основа мРНК-вакцин, базирующаяся на геноме положительной цепи вирусов, обычно альфа-вирусов. Эти мРНК-вакцины основаны на сконструированном вирусном геноме, содержащем гены, кодирующие механизм репликации РНК, тогда как последовательности структурных белков заменены представляющим интерес геном (GoI), полученные в результате геномы называют репликонами. Эти вакцины получили название самоамплифицирующихся мРНК-вакцин, и их саморепликацией можно управлять посредством синтеза РНК-зависимого РНК-полимеразного комплекса, генерирующего множество копий антиген-кодирующей мРНК, и они экспрессируют высокие уровни гетерологичного гена при введении в цитоплазму клетки хозяина, имитируя продукцию антигенов in vivo вирусными патогенами, запуская как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ 26. Самоамплифицирующиеся мРНК-вакцины могут быть получены из сконструированных геномов вируса Синдбис, вируса леса Семлики, вируса Кунджин и других 30. Самоамплифицирующиеся мРНК (

9-11 т.п.н.) получают из матричной ДНК при помощи процедур, похожих на описанные ранее для обычных молекул мРНК и РНК, которые можно получать в большом масштабе in vitro. После того, как очищенный РНК-репликон доставлен в клетку хозяина, либо в виде частиц вируса, либо в виде синтетически сконструированной РНК, он широко транслируется и амплифицируется путем кодирования РНК-зависимой РНК-полимеразой. Опубликованные результаты показали, что, по сравнению с быстрой экспрессией обычных мРНК, вакцинация самоамплифицирующимися мРНК-вакцинами дает более высокие уровни экспрессии антигена, хотя и позже по времени, in vivo задержка достигает нескольких дней. Эквивалентная защита достигается, однако, при гораздо меньшей дозе РНК [31]. Из-за нехватки вирусных структурных белков репликон не производит инфекционных частиц вируса. Кроме того, как обычная мРНК, так и самоамплифицирующиеся мРНК, не могут встраиваться в геном хозяина и естественным образом разлагаются в процессе экспрессии антигенов. Эти характеристики показывают, что мРНК-вакцины способны стать намного безопаснее других вакцин, а также являются многообещающей платформой для вакцинации.

Сконструированная мРНК с потенциальной эффективностью

Стабильность и трансляция мРНК имеют решающее значение для создания успешной РНК-вакцины [32, 33]. В процессе трансляции чистота мРНК определяет ее стабильность и выход белка [34]. Загрязнение дцРНК, получающимися из-за побочной полимеразной активности РНК, приводит к ингибированию трансляции и к деградации клеточной мРНК и рибосомной РНК, тем самым снижая экспрессию белка из-за прерывания механизма трансляции. Удаление дцРНК может значительно увеличить трансляцию [35]. Избыток компонентов, а также короткие и двухцепочечные РНК (дцРНК), могут быть удалены очисткой. Изначально для этой цели использовался хлорид лития (LiCl), однако его применение ограничено переходом на промышленное производство мРНК-вакцин, кроме того, он не удаляет дцРНК. Для удаления любых оставшихся продуктов при производстве мРНК в большом масштабе, а также для реализации процессов согласно правилам организации производства и контроля качества лекарственных средств, может быть использована очистка при помощи жидкостной экспресс-хроматографии белков или высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) 36. Некодирующие 5′-фланкирующие и 3′-концевые последовательности открытой рамки считывания имеют определяющее значение для трансляции. 5′-нетранслируемая область, такая как последовательность Козака, или 5′-кэпы необходимы для эффективного продуцирования белка 39. 3′-нетранслируемая область, содержащая оптимальный поли(А)-сигнал, определяла стабильность мРНК и увеличивала трансляцию белка 45. Дополнительно, кодон оптимизации является популярным методом для того, чтобы избежать редких кодонов с низким коэффициентом использования, для увеличения продуцирования белка, содержания мРНК и стабильности 46.
мРНК вакцины эффективны при экспрессии антигена, но последовательность и вторичные структуры, образуемые мРНК, распознаются рядом естественных иммунных рецепторов, и это распознавание может подавлять трансляцию белка. Благодаря развитию понимания биологии РНК появилось несколько методов, которые могут использоваться для увеличения эффективности мРНК-вакцин, включая оптимизацию последовательности и применение модифицированных нуклеозидов. Распознавания естественными иммунными сенсорами можно избежать путем введения модифицированных нуклеозидов, таких как псевдоуридин (Ψ), 5-метилцитидин (5 mC), в структуру кэп-1 и оптимизированные кодоны, которые, в свою очередь, улучшают эффективность трансляции 52. В течение транскрипции мРНК in vitro незрелая мРНК может образовываться как примесь, ингибирующая трансляцию путем стимулирования естественной иммунной активации. Очистка при помощи жидкостной экспресс-хроматографии белков и ВЭЖХ разрешает эту проблему [35, 37].
В настоящее время большинство применяемых вакцин, за исключением некоторых вакцин для животных, требуют транспортировки и хранения в условиях непрерывной холодовой цепи, которая легко нарушается, особенно в бедных сельскохозяйственных регионах тропических стран; этим требованиям не отвечают доступные эффективные вакцины для профилактики и контроля инфекционных заболеваний. По этой причине разработка термостойких вакцин представляет большой интерес.
Оптимизация состава синтетических мРНК-вакцин показала, что получить термостабильные вакцины можно. Результаты, представленные Jones, показали, что сублимированная мРНК с трегалозой или депротеинизированная мРНК стабильна по меньшей мере в течение 10 мес. при температуре 4 0С. После трансфицирования эти мРНК экспрессировали высокие уровни белков и обеспечивали высокоэффективный и длительный иммунитет на новорожденных и пожилых животных моделях [56]. Другая лиофилизированная мРНК-вакцина продемонстрировала стабильность при температуре 5-25 0С в течение 36 месяцев и при 40 0С в течение 6 месяцев [57]. Stitz и соавт. показали, что когда протамин-инкапсулированная вакцина от вируса бешенства на основе обычной мРНК была подвергнута колебаниям температуры в интервале от 4 до 56 0С в течение 20 циклов и действию температуры 70 0С, ее иммуногенность и защитное действие не пострадали [58]. Инкапсулирование мРНК в катионную липосому или проникающий пептид (CPP) предохраняло мРНК от разложения рибонуклеазой. Эти интересные применения будут обсуждаться в разделе, посвященном методам доставки.

РНК-вакцины для профилактики инфекционных заболеваний

На протяжении последних двух десятилетий широко исследовались мРНК-вакцины для профилактики инфекционных заболеваний, а также для профилактики и лечения рака. К настоящему моменту достигнуты значительные успехи [19, 20]. Были созданы мРНК-вакцины от рака, предназначенные для экспрессии опухоль-ассоциированных антигенов, которые стимулируют клеточно-опосредованный иммунный ответ с целью уничтожения или подавления раковых клеток [59]. Большинство изученных вакцин от рака являются в большей степени терапевтическими, чем профилактическими, и они рассмотрены в ряде источников [20, 60, 61]. мРНК-вакцины против инфекционных заболеваний могут быть профилактическими и терапевтическими. мРНК-вакцины, экспрессирующие антиген инфекционного патогена, вызывают сильный Т-клеточный и гуморальный иммунный ответ [8, 16, 19]. Как описано выше, процесс производства мРНК-вакцин полностью внеклеточный, простой и быстрый по сравнению с получением целых микробных, живых аттенуированных или субъединичных вакцин. Этот быстрый и простой процесс производства делает мРНК многообещающим биопродуктом, который может удовлетворить потребность в вакцинах против новыхинфекционных заболеваний. Производство РНК в широком масштабе, удовлетворяющим нужды промышленного производства, – это первый шаг к созданию мРНК-вакцин. В настоящее время все компоненты, необходимые для производства мРНК, доступны, и их качество соответствует стандартам GMP; однако некоторые компоненты поставляются в ограниченном количестве. На первом этапе было проведено большое количество исследований по разработке мРНК-вакцин против рака, и они показали осуществимость производства транскрибированной in vitro РНК для клинического применения [60]. Было проведено несколько проектов по мРНК-вакцинам против инфекционных заболеваний, хотя клиническая оценка все еще остается ограниченной. Например, несколько платформ для вакцин на основе РНК были использованы для разработки вакцин против гриппа. Некоторые опубликованные результаты показали, что вакцины против гриппа на основе РНК вызывают широкий защитный иммунный ответ не только против гомологичных, но и против гетеро-субтипических вирусов гриппа 62. мРНК-вакцины против гриппа дают большие надежды, поскольку они сделаны на платформе без использования куриных эмбрионов, и лидируют по производству антигена в клетках млекопитающих. Недавно опубликованные результаты демонстрируют, что потеря центра гликозилирования из-за мутации в гемаггютинине (HA) адаптированной к куриному эмбриону штамму вакцины против H3N2 приводило к слабой нейтрализации циркулирующих варусов H3N2 у вакцинированных людей и хорьков. Напротив, процесс производства мРНК-вакцины осуществляется без использования куриных эмбрионов, и кодируемые мРНК белки имеют нужную структуру и гликозилированы в клетках хозяина после вакцинации, что, таким образом, устраняет риск производства неправильных антигенов [67, 68].
мРНК также используется в ветеринарии для профилактики инфекционных заболеваний у животных. Pulido и соавт. показали, что иммунизация при помощи транскрибированной in vitro мРНК обеспечивала у мышей защиту против энтеровирусного везикулярного стоматита [69]. Saxena и соавт. продемонстрировали, что самоамплифицирующаяся мРНК-вакцина, кодирующая гликопротеин вируса бешенства, вызвала иммунный ответ и обеспечила защиту у мышей, и потенциально может использоваться для профилактики бешенства у собак [70]. Недавно VanBlargan и соавт. разработали инкапсулированную в липидные наночастицы (ЛНЧ) модифицированную мРНК-вакцину, кодирующую гены prM и E вируса Повассан (POWV). Эта мРНК-вакцина вызывала сильный гуморальный иммунный ответ не только против штаммов POWV, но и против эволюционно далекого вируса Лангат [71]. Как описано ранее, модификация нуклеозидов и оптимизация кодонов может помочь избежать распознавания естественными иммунными сенсорами и улучшить эффективность трансляции. В Таблице 2 приведены данные исследований, проведенные на мРНК-вакцинах против инфекционных заболеваний, полученных с использованием модифицированных и не модифицированных нуклеозидов [52, 58, 72-78].

Таблица 2. Нуклеозид-модифицированные или немодифицированные мРНК-вакцины против инфекционных заболеваний.

Кроме использования в качестве вакцины, мРНК может применяться в терапевтических целях. Интересно, что недавняя публикация Pardi и соавт. показала, что применение мРНК, кодирующей легкие и тяжелые цепи нейтрализующего антитела широкого спектра действия против ВИЧ, инкапсулированной в липидные наночастицы (ЛНЧ), защищало гуманизированных мышей от внутривенно введенного ВИЧ [79]. Эти данные предполагают, что использование мРНК с модифицированными нуклеозидами может быть расширено на пассивную иммунотерапию против ВИЧ, цитомегаловируса (ЦМВ), вируса папилломы человека и т. д. Самоамплифицирующиеся мРНК-вакцины способны обеспечивать раннюю экспрессию антигенов и вызывать Т-клеточный иммунный ответ. В таблице 3 мы собрали публикации, посвященные самоамплифицирующимся мРНК-вакцинам против инфекционных заболеваний, доставляемых в виде частиц вирусных репликонов или в виде синтетических мРНК [80, 82-85, 87, 91, 92].

Таблица 3. Самоамплифицирующиеся мРНК-вакцины против инфекционных заболеваний

Путь доставки и состав мРНК-вакцин

Путь введения и рецептура мРНК-вакцин имеют решающее значение для определения кинетики и величины экспрессии антигена, а также силы иммунного ответа. Например, внутривенное введение немодифицированной депротеинизированной мРНК приводило к быстрому ее расщеплению рибонуклеазами и стимулированию естественного иммунного ответа, но эти ограничения могут быть преодолены при помощи подходящих систем доставки и модификации мРНК [93]. мРНК-вакцины применяют системным или локальным методом, основанном на требованиях к локализации экспрессии антигена. Прямая внутримышечная (в/м), внутрикожная (в/к) или подкожная инъекция транскрибированной in vitro мРНК — это основные пути доставки для мРНК-вакцин против инфекционных заболеваний, тогда как внутрибрюшинное (в/б) и внутривенное (в/в) применение используются тогда, когда требуется системная экспрессия нужных антигенов, главным образом при терапевтическом применении. В недавнее время было опубликовано большое количество работ, где показано, что разнообразные антигены могут быть экспрессированы с высокой эффективностью и вызывать сильный гуморальный и клеточный иммунный ответ после вакцинации с использованием мРНК. Например, для исследования влияния пути введения на кинетику экспрессии антигена использовались липидные наночастицы (ЛНЧ), заполненные обычной мРНК с модифицированными нуклеозидами, кодирующей люциферазу светлячка [94]. В/м и в/к введение обеспечивало наилучший уровень и длительность эффекта, продукция белка достигала максимума через 4 часа и поддерживалась локально в течение 8-10 дней посте инъекции, в зависимости от дозы. Как в/м, так и в/к введение макакам-резусам обычной мРНК с модифицированными нуклеозидами, кодирующей грипп H10, инкапсулированной в ЛНЧ, вызывало защитный титр, но этот ответ быстрее достигался при внутрикожном введении, чем при внутримышечном [95].
CV7201 это кандидат в мРНК-вакцины, находящийся в стадии исследований в CureVac AG. в/м и в/к введение CV7201 у мышей и свиней вызывало сильный гуморальный и Т-клеточный иммунный ответ [77]. В фазе I клинических испытаний CV7201 продемонстрирована долгосрочную безопасность и иммуногенность против вируса бешенства при низкой дозе. Относительно безопасности, не наблюдалось никаких отличий между в/м и в/к введением или между использованием шприц-ручки или безыгольной инъекции CV7201. Однако, когда были оценены титры нейтрализующего антитела, индуцированного CV7201, безыгольная инъекция оказалась предпочтительнее использования шприц-ручки [57]. При испытании вакцины против гриппа введение внутрь лимфоузла (в/у) депротеинизированной мРНК вызывало сильный CD4 и CD8 Т-клеточный иммунный ответ у мышей, и повторение в/у инъекции модифицированной мРНК приводило к примированию антиген-специфичных CD4 и CD8 Т-клеток, тогда как подкожное в/к введение не приводило [96]. Сочетание двух и более способов доставки исследовалось и применялось при разработке противораковой мРНК-вакцины. Сочетание в/в и в/к инъекций TriMix-DC-MEL продемонстрировало благоприятный долгосрочный результат у пациентов с широким CD8 и CD4 Т-клеточным иммунным ответом [97]. Дальнейшие исследования показали, что в/у и внутриопухолевое введение TriMix мРНК в дендритные клетки давало лучший терапевтический долгосрочный результат, чем введение в другие места [98, 99]. Однако, в/к введение РНК-активных вакцин показало иммунный ответ, близкий к достигаемому при в/у применении обычных мРНК-вакцин, что является противоречивым результатом [100]. В общей сложности, эти результаты подчеркивают важность пути доставки для эффективности мРНК-вакцин.
Аналогично, Fleeton и соавт. показали, что в/м инъекция транскрибированнной in vitro депротеинизированной самоамплифицируемой мРНК-вакцины на основе генома вируса леса Семлики может вызывать защитный иммунный ответ [62]. Geall и соавт. показали, что в/м введение у мышей и хлопковых хомяков очень низкой дозы самоамплифицирующейся мРНК, кодирующей F-белок респираторно-синцитиального вируса (RSV), инкапсулированной в синтетические ЛНЧ, приводило к очень высоким титрам IgG1 и интерферон (IFN)-продуцирующих CD4 и CD8 Т-клеток [22].
Инструменты для доставки столь же важны для эффективности мРНК-вакцин. В идеале система доставки должна защищать РНК от возможного разложения рибонуклеазой и обеспечивать эффективное поглощение клеткой-мишенью, легкое высвобождение РНК из системы и выход из эндосомы. Преодоление барьера цитоплазматической мембраны и избежание разложения рибонуклеазами – это начальные шаги к эффективной доставке РНК в клетку-мишень. Конечные важные требования к оптимальной системе доставки это отсутствие как токсичности, так и стимуляции иммунитета. На начальных этапах синтезированная in vitro мРНК напрямую вводилась животным с помощью инъекций. Позже подтвердилось, что мРНК-вакцины, помещенные в липосомы, вызывают вирус-специфичный противогриппозный цитотоксический Т-лимфоцитарный (CTL) иммунный ответ у мышей [72]. Несколько методов использовались для увеличения эффективности доставки, и очень большой прогресс был достигнут в области конструирования РНК-вакцин с системой доставки 101. Дополнительно к физическим методам генной пушки и электропорации, мРНК-вакцины доставляли в цитоплазму при помощи катионных липидов и полимеров. Было также показано, что мРНК в виде катионной наноэмульсии тоже вызывает сильный иммунный ответ [8, 23, 85]. Однако, некоторые из этих систем доставки продемонстрировали токсичность in vivo, что ограничивает их применение у людей [104]. Новые платформы для использования в качестве средств транспорта для мРНК-вакцин были разработаны с целью избежать ограничения из-за токсичных агентов химической трансфекции. Большинство этих платформ использовали ЛНЧ на основе катионного липида или липидных полимеров. ЛНЧ облегчают доставку РНК и сильно увеличивают экспрессию антигена. Некоторые группы использовали липиды или полимеры в качестве платформ для доставки мРНК-вакцин против ВИЧ-1 подкожным способом, что эффективно вызывало ВИЧ-специфичный CD4 и CD8 Т-клеточный ответ, или интраназальным способом, что вызывало антиген-специфичный иммунный ответ [73, 105, 106]. мРНК участка гена вируса гриппа HA, инкапсулированная в липид, также была изучена, и было показано, что однократное введение вызывает активацию Т-клеток [107]. Сочетание ЛНЧ-технологии с модификацией нуклеозидов увеличивает эффективность мРНК-вакцин. Модифицированная мРНК вируса гриппа HA из H10N8 и H7N9, помещенная в ЛНЧ, вызывала сильный защитный иммунный ответ у мышей, хорьков и яванских макак [108].
Другая цель, против которой ЛНЧ-доставка мРНК показала очень высокий потенциал, это вирус Зика. Не существует вакцины, способной предотвратить это переносимое комарами заболевание, и недавняя эпидемия вызвала беспокойство во всем мире. Richner и соавт. сообщили, что две вакцины с модифицированной мРНК, кодирующей редактированный prM-E-ген или ген дикого типа, инкапсулированной в ЛНЧ, вызывали высокий порядок титра нейтрализующего антитела [57, 109].
Вакцины на основе модифицированной мРНК, созданные с использованием ЛНЧ, также обеспечивали сильный иммунный ответ и защищали морских свинок от заболевания, вызываемого вирусом Эбола [52]. Внутривенное введение модифицированной мРНК, инкапсулированной в ЛНЧ, продемонстрировала максимальную экспрессию белков через 6 часов после введения [110]. Как в/к, так и в/м введение нерепликационной мРНК, кодирующей вирус гриппа H10, инкапсулированной в ЛНЧ, давало высокие защитные титры, но этот ответ наступал быстрее при в/к введении по сравнению с в/м Введением [95].
ЛНЧ являются популярным средством доставки для вакцин на основе самоамплифицирующейся мРНК. Множество исследований показали, что самоамплифицирующаяся мРНК, инкапсулированная в ЛНЧ, вызывала сильный клеточный и гуморальный иммунный ответ при разных путях введения [19, 107, 111]. Самоамплифицирующиеся мРНК-вакцины с ЛНЧ в составе, кодирующие антигены вируса гриппа, приводили к сильному Т- и В-клеточному иммунному ответу и обеспечивали защиту против заражения гомологичным и гетерогогичным вирусами гриппа [63, 65, 112].
Проникающие пептиды (CPP), вид катионных пептидов, представляют собой многообещающий инструмент для доставки мРНК к внутриклеточным целям. Протамин – это обогащенный аргинином катионный пептид, который может связываться с мРНК и транспортировать ее в цитоплазму. Протамин широко изучался в качестве системы доставки для мРНК-вакцин против рака и вирусов. С применением протамина была создана платформа для самоамплифицирующейся вакцины на основе активированной мРНК, и были продемонстрированы ее возможности против различных инфекционных заболеваний и рака [76, 77, 100]. Недавно Coolen и соавт. сконструировали инновационную платформу для доставки, состоящую из полимолочной кислоты и катионных проникающих пептидов в качестве агента, конденсирующего мРНК. Эти нанокомплексы были поглощены дендритными клетками, и это вызвало сильную экспрессию белков и естественный иммунный ответ [113].
Самоамплифицирующаяся мРНК, кодирующая HA [A/California/ 07/2009(H1N1)], инкапсулированная в наноэмульсию масло-в-воде, стимулировала защиту против гомологичного и гетерологичного вируса гриппа [65]. Использование полиэтиленимина (PEI) в составе с самоамплифицирующейся мРНК, кодирующей H1N1/PR8-HA, приводило к значительно более высокому титру антитела и к более длительной устойчивой экспрессии антигена, чем применение просто самоамплифицирующейся мРНК [31, 114]. Хитозан и PEI использовались для доставки самоамплифицирующейся мРНК и в виде наночастиц [114, 115]. Chahal и соавт. разработали интересную платформу, состоящую из химически модифицированной дендримерной наночастицы, конденсирующей самоамплифицирующуюся мРНК, кодирующую грипп HA. Однократная иммунизация мышей вызывала сильный CD8+ Т-клеточный и гуморальный ответ и защищала мышей против заражения широким спектром летальных патогенов, включая грипп H1N1, Toxoplasma gondii и вирус Эбола [64].
В настоящее время исследуются и другие новые наночастицы, такие как полиплексы, наноплексы, а также доставка с помощью пористых каркасных полимеров 120. Хотя в области разработки средств доставки достигнуты очень большие успехи, возможно, идеальной платформой будет сочетание различных средств доставки мРНК, а также потребуются еще большие усилия в направлении понимания механизма действия.

Механизм иммунного ответа, вызванного мРНК-вакцинами

Клинические испытания

По сравнению с профилактическим и терапевтическим применением мРНК при раке, клинические испытания мРНК-вакцин против инфекционных заболеваний все еще находятся на раннем этапе. Пилотные клинические испытания с ДК, трансфицированными мРНК, кодирующей различные антигены ВИЧ-1, клеточные молекулы, или антиген pp65 цитомегаловируса человека показали, что мРНК-вакцины безопасны и могут вызывать антиген-специфичный CD4+ и CD8+ Т-клеточный иммунный ответ, однако, уменьшения вирусной нагрузки не наблюдалось [108].
В недавних клинических испытаниях протамин-связанной мРНК-вакцины против вируса бешенства были получены результаты, показавшие, что РНК, связанная в комплекс с протамином, безопасна и хорошо переносится in vivo, но эффективность сильно зависит от дозы и пути применения. Эффективность применения с помощью безыгольного устройства была намного выше, чем при прямой инъекции [57, 161]. Результаты фазы I показали, что ЛНЧ с модифицированной мРНК-вакциной против H10N8 вызывали сильный гуморальный иммунный ответ у добровольцев при легкой или умеренной нежелательной лекарственной реакции [108].

Перспективы вакцин на основе РНК

Множество публикаций показали, что вакцины на основе мРНК представляют собой многообещающую платформу, которая является гибкой, масштабируемой, недорогой и не нуждающейся в холодовой цепи. Что еще более важно, вакцины на основе мРНК могут удовлетворить потребность в эффективных вакцинах против новых инфекционных заболеваний. В рамках множества доклинических и клинических проектов были достигнуты большие успехи в направлении возможного применения мРНК-вакцин, и было сделано предположение, что профилактика и терапия на основе мРНК может применяться и у человека. Несмотря на то, что при медицинском применении величина ответа была меньше, чем предсказывалось по животным моделям, результаты пилотных клинических испытаний показали хорошую переносимость и то, что мРНК-вакцинация может вызывать антиген-специфичный Т- и В-клеточный иммунный ответ [57, 108]. Поэтому мРНК все также подает большие надежды, но для полноценной разработки мРНК-вакцин необходимо дальнейшее изучение механизма действия и возможностей. Для создания применимых мРНК-вакцин и уменьшения дозы необходим поиск новых стратегий. Как сказано выше, молекулярный механизм естественного иммунного ответа, стимулированного мРНК через PAMP-распознавание, остается неясным. Сделаны большие усилия в направлении улучшения стабильности и эффективности мРНК-вакцины доставки in vivo, включая введение 5′- и 3′-конечных нетранслируемых областей и химически модифицированных нуклеозидов 162. Исследование показало, что удаление примесей дцРНК методом ВЭЖХ-очистки транскрибированной in vitro мРНК продляло трансляцию [35]. Исследование продемонстрировало, что модифицированный нуклеозид уменьшает естественный иммунный ответ и увеличивает экспрессию белка. Оптимизация 5′-нетранслируемой области мРНК, вторичные структуры которой могут распознаваться клеточно-специфичными РНК-связывающими белками или молекулами PAMP, может максимизировать трансляционный выход мРНК при терапии или вакцинации [43, 165]. Однако, неправильное введение модифицированных нуклеозидов может оказывать отрицательное влияние на продукты транскрипции и увеличивать затраты.
Основываясь на результатах вышеописанных исследований, могут быть достигнуты лучшее понимание механизма действия мРНК-вакцин, определение и разработка новых систем доставки и улучшение дизайна мРНК-вакцины [166].
мРНК-вакцины имеют огромный потенциал и предполагают преимущества по сравнению с обычными вакцинами. Растущий массив доклинических и клинических результатов показывает, что профилактика и терапия с использованием мРНК может быть полезной для предотвращения инфекционных заболеваний и для лечения опухолей, а также то, что мРНК-вакцины безопасны и переносимы животными и человеком. Кроме того, будущие усовершенствования должны повысить антиген-специфичный иммунный ответ и величину памяти ответа иммунных клеток, включая память В- и Т-клеточных ответов. Хотя технология мРНК-вакцин не очень широко испытывается на людях, в последнее время появились публикации о доклинических и ранних клинических испытаниях, в которых сообщается о перспективных результатах. Это побудило биокомпании заняться коммерческой разработкой мРНК-вакцин [167, 168]. Несколько частных фондов и организаций поддержали исследование и разработку мРНК-вакцин [169, 170]. Несмотря на необходимость дальнейшей оптимизации процесса производства мРНК-вакцин, эти процессы, мы надеемся, будут упрощены с тем, чтобы начать крупномасштабное производство. Применение мРНК-вакцин у человека и животных — всего лишь вопрос времени.

Финансирование

Priority Academic Talent Team Cultivation Program of Shandong Colleges and Universities, Talent Program of Qingdao Agricultural University. The National Thirteen-Five Key research and development program of China (2017YFD0500805).

Кофликт интересов

Благодарность

Мы приносим свои извинения за то, что не включили все публикации наших коллег.

Источник